5.Этапы микроклонального размножения растений in vitro.
1)выбор раст-й донора, взятие экспланта (часть органа / ткани раст-й, выращ-й на пит среде / использ-ся для получ калуса) и изолирование экспланта, его стерилизация и введение в культуру in vitro.
2)МКР in vitro через калус бок. побегами, эмбриойдами.
3)Укоренение побегов подращ-я и накопление растений (хранение t 2-10°).
4)Пеесадка раст-й в субстрат / почву, адаптация к внешним условиям (in vivo — внутри клети??). Высадка в теплицу, реализация.
6.Экспланты
Экспланты- часть органа или такни, для культивирования in vitro или получения каллуса.
Выбор экспланта зависит от: вида раст-я, времени года, фазы развития растений и развития органов из к-х взят эксплант
Эксплантами могут быть: меристемы, часть листа, цветоложе, тычинки, лепестки, часть стебля.
Корни сложно стерилизовать из-за наличия микоризы. А видоизмененные побеги можно брать.
Хорошо перевод-ся в культуру in vitro 2400 видов культивир в фазу актив-го роста. Но лилии Весной/осенью, летом плохо. Тюльпаны в период покоя (как листья засохнут их выкапывают).
Для грубых Э стерилизац р-ром сулимы (выдержка 5-10 мин), для нежных гипохлорит натрия NaCIO и Гипохлорит кальция ca(clo)2конц 5-9 % 5-15 мин. Для уничтож эпифитной микрофлоры.
Самое вложное при введение культуры в ин витро — стерильность. Можно стерил антибиотиками.
Обычно на питательные среды высаживают небольшую часть меристемы до 0,5 мм. В целом закономерность такова: чем меньше величина меристемы, тем больше вероятность получения безвирусных растений.
Культивирование растений из апикальных меристем позволяет получать безвирусный оздоровленный посадочный материал практически всех сельскохозяйственных культур.
Получение микрочеренков
Использование микрочеренков при клональном размножении растений in vitro имеет наиболее широкое распространение. В качестве черенков чаще всего используются просыпающиеся почки или верхушки молодых побегов.
7) Методы стерилизации эксплантов.
В период акт роста утром берут Э с раст-й (верхушки побегов) -> лаб -> укорач-т, облам-т листья -> склад в марлевый мешочек -> этикетка -> промывка в мешочке 2 часа -> 20 мин в тёпл воде + перемешивание с добавл-м ПАВ
Экспланты подвергают стерилизации. Берут мешочек, на нем этикетка. Сначала промывают водой 2 часа, встряхивают 20 минут, затем растворяют ядовитые вещества р-р сулимы HgCl2 – 0,1 % 5-7 мин, NaClO и Ca(Cl0)2 – 5-7% 10-15 минут, промывают водой стерильной 3-5 раз, затем вычлиняют меристемы, если оздорав от вируса, то 0,1-0,3 мм, если просто размнож-е 1-2 мм. -> помещают в пробирку со средой Мурасига-Скуга. В ламинарном боксе высушивают на питательную среду, применяют антибиотики.
8) Питательные среды и условия выращивания растений in vitro.
Питательная среда Мурасига-Скуга вводят макро – микроэлементы, витамины В1 В6 С РР, тиамин, пиридоксин, фолиевая кислота, хлористый кальций, хелат железа, глицин, 6-БАП, глюкоза, также вносят агар для застывания среды.
1)высокие дозы АУК в среде вызыв образ-е калуса
2)при соотноше УИК к кинетину 1:1-10 из калуса образ-ся стебли
3)при УИК к кинетину 1:100, 1:10 образ-ся КС
Все работы по микроклональному размножению проводят асептически в ламинарном боксе, в котором дует ветер 0,4 м/с. Включают продувку за 30 минут. Рядом на столе готовят стерильную чашку Петри, 2 салфетки, пит среду, бумажные колпачки, поддоны, штативы. Вымыть руки спиртом, сесть в бокс и принять салфетки, протереть салфеткой стол, чашку Петри, инструменты (пинцет и ножик), питательную среду.
Большинство растений выращ при t 20-25°, для троп 30, лук / нарциссы / тюльпаны 18.
Источник
In vitro растения микроклонирование
Продукция и услуги
Мы принимаем заказы на индивидуальное размножение из маточных растений Заказчика от 1000 растений на сорт. Уважаемые Клиенты! Мы принимаем заказы на индивидуальное размножение из маточных растений Заказчика. Обращаем Ваше внимание, что при выполнении индивидуальных заказов: заказы принимаются от 1000 растений на сорт; если культура представлена в нашем каталоге, но Вы хотите заказать размножение нового сорта на основе ваших маточных растений (название сорта открыто, есть право продажи другим клиентам), то цена растений будет близка (или равна) к каталожной. В случае эксклюзивного размножения (название сорта скрыто, без права продажи другим клиентам) — цена будет выше на 50% от каталожной. если культура не представлена в нашем каталоге, то расчет цены будет производиться индивидуально в зависимости от сложности работ. Обращаем Ваше внимание, что Компания имеет право отказать Вам в индивидуальном размножении без объяснения причины. Подробную информацию по индивидуальному размножению растений Вы можете узнать у менеджеров.
Микрорастения in vitro – это посадочный материал нового поколения. Читайте о плюсах такого посадочного материала в статье. Наша компания на основе технологии клонального микроразмножения растений производит посадочный материал трёх категорий: Микрорастения in vitro, сокращенное обозначение “In Vitro”. Микрорастения in vitro неукоренненные — in vitro Н.У. Адаптированный посадочный материал с закрытой корневой системой (ЗКС), сокращенное обозначение “Ex Vitro (ЗКС)” В этой статье мы с Вами рассмотрим производство микрорастений In Vitro. Микрорастения in vitro – это посадочный материал нового поколения, обладающий рядом неоспоримых преимуществ по сравнению с растениями, полученными традиционными методами размножения (отводки, черенкование, прививка), а именно: Растения свободны от фитопатогенов; Обладают повышенными темпами роста и развития, а в некоторых случаях и более ранним началом цветения и плодоношения; Высокая выравненность посадочного материала вследствие его генетической однородности; Возможность размножения в неограниченных количествах гибридных форм растений, с сохранением всех ценных признаков; Отсутствие сезонности при производстве посадочного материала; Возможность производства больших объемов посадочного материала в сжатые сроки; Относительно низкая стоимость по сравнению с классическими типами посадочного материала.
В этой статье мы с Вами рассмотрим производство адаптированных растений Ex-Vitro (ЗКС). Наша компания на основе технологии клонального микроразмножения растений производит посадочный материал трёх категорий: Микрорастения in vitro, сокращенное обозначение “In Vitro” Микрорастения in vitro неукоренненные — in vitro Н.У. Адаптированный посадочный материал с закрытой корневой системой (ЗКС), сокращенное обозначение “Ex Vitro (ЗКС)” В этой статье мы с Вами рассмотрим производство адаптированных растений Ex-Vitro (ЗКС). Адаптированный посадочный материал с закрытой корневой системой (ЗКС) получают путем адаптации микрорастений in vitro в условиях защищенного грунта. Растения с ЗКС поставляются в кассетах с различным объемом ячейки и их количеством (два основных типа кассет на 144 и на 84 ячеек). В отношении агротехники и условий ухода адаптированные растения с ЗКС ничем не отличаются от посадочного материала, полученного классическими способами. Преимущества: Растения не требуют специальных условий и ухода (адаптации в условиях высокой влажности), как в случае микрорастений in vitro; Минимальный процент выпада растений. Период доращивания составляет 1,5 – 2 месяца.
Источник