Методы выделения сапонинов из лекарственного растительного сырья
Выделение сапонинов из растительного сырья включает следующие стадии:
1 стадия. Получение суммарной фракции сапонинов
Экстрагируют сапонины из сырья обычно полярными растворителями:
— метанолом или этанолом различной концентрации (50%-70%);
— 0,9% раствором хлорида натрия;
!(Сырье предварительно обезжиривают петролейным или диэтиловым эфиром, гексаном, трихлорметаном, метиленхлоридом. Необходимость этой операции связана с удалением из растительного сырья жироподобных веществ, прежде всего стеринов, с которыми большинство гликозидов способны образовывать нерастворимые в водных спиртах комплексные соединения)
2 стадия. Очистка его от сопутствующих веществ
а) сапониновые фракции очищают переосаждением:
- c помощью свойства сапонинов хорошо растворяться в горячих концентрированных спиртах, и выпадать в осадок – при охлаждении спирта;
- основаны на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с бария гидрооксидом или свинца ацетатом, комплексы с холестеролом, таннидами, белками. Полученные соли разлагают кислотой серной, холестероловые комплексы разрушают экстрагированием холестерина бензолом или эфиром, таниновые – экстоакцией водной суспензии цинка оксида, белковые – экстракцией сапонинов полярными органическими растворителями.
б) сапониновые фракции очищают гельфильтрацией или хроматографическими методами.
3 стадия. Разделение суммы сапонинов на индивидуальные гликозиды.
При выделении и разделении сапонинов методом колоночной хроматографии в качестве сорбента используют оксид алюминия, силикагель, активированный уголь, полиамид.
Методы качественного анализа сапонинов
Для обнаружения сапонинов в извлечении из растительного сырья пользуются реакциями, основанными на физических, химических и биологических свойствах этих веществ.
физические методы анализа:
биологические методы анализа:
- проба на пенообразование,
- определение угла вращения
- реакция Либермана-Бурхарда (для стероидных сапонинов);
- проба Лафона;
- реакция Сальковского;
- реакция Санье;
- реакции осаждения
(с холестерином, солями бария и магния, с солями меди, ацетатом свинца)
Методы количественного определения сапонинов в сырье
Для количественного определения сапонинов в растительном сырье применяют следующие методы:
1) Биологические методы, основанные на биологических свойствах сапонинов (определение гемолитического, рыбьего индексов).
Гемолитический индекс (HI) — это наименьшая концентрация извлечения из сырья, которая вызывает полный гемолиз эритроцитов, рассчитанная на единицу исследуемого вещества.
Из настоя растительного сырья на изотоническом растворе (0,9% раствор NaCl) в концентрации 1:10 готовят ряд разведений различной концентрации, затем к каждому разведению добавляют по 1 мл взвеси эритроцитов (2% свежей дефебринированной бараньей крови в изотоническом растворе) и встряхивают. Через определенное время (через сутки) наблюдают результаты гемолиза и рассчитывают результат.
- Различные сапонины при одинаковой концентрации имеют разный гемолитический индекс;
- Положительный результат гемолитической пробы еще не является доказательством наличия сапонинов, т. к. гемолиз дают и другие растительные вещества (например, эфирные масла, кислоты, спирты)
- Сапонины могут находиться в растении в комплексе со стеролами и не проявлять гемолитической активности до разрушения этого комплекса.
2) Физический метод, основанный на физических свойствах сапонинов (определение пенного числа).
Пенное число – наименьшая концентрация сапонинов в извлечении, вызывающая образование стойкой пены в течение 1 мин.
3) Физико-химические методы: Общих физико-химических методов для определения содержания сапонинов не существует.
- гравиметрический метод (осаждение и взвешивание осадка);
- титрометрический (в том числе потенциометрическое титрование);
- колориметрический;
- спектрометрический.
Источник
САПОНИНЫ
Сапонины (лат. sapo, saponis мыло) — растительные гликозиды, растворяющиеся в воде с образованием коллоидных растворов, уменьшающие величину поверхностного натяжения воды и подобно мылу образующие пену. В медицине отдельные Сапонины применяют в качестве лекарственных средств. Стероидные Сапонины служат сырьем для получения стероидных гормонов (см.). Сапонины ядовиты. Ограниченно используются в парфюмерной и пищевой промышленности.
Было установлено, что при приеме Сапонинов внутрь организм животных и человека становится более восприимчив к ядам, лекарственным средствам и др.
Сапонины являются гликозидами (см.), агликоновые (не содержащие углеводов) части молекул к-рых относятся в основном к пентациклическим тритерпенам, стероидам спиростенолового ряда и к стероидным алкалоидам. По биологической активности С. отличаются от сердечных гликозидов (см.) и от алкалоидов (см.).
С. обладают способностью эмульгировать жиры, нек-рые С., особенно дигитонин, образуют с холестерином и другими 3-оксистероидами трудно растворимые в воде и в разбавленном этаноле соединения, при кипячении к-рых с толуолом или ксилолом извлекается холестерин (см.). При кипячении с разбавленными к-тами С. гидролизуются на сахара (монозы) и соответствующие агликоны — сапогенины.
С лечебной целью используют экстракты и настойки из растений, содержащих С., а также препараты, приготовленные на их основе,— диоспонин, полиспонин, сапарал, эскузан, эсфлазид и др. (см. Лекарственные растения).
В мед. практике в качестве отхаркивающих средств (см.) применяют корень истода (Rad. Polygalae), корень и корневище девясила (Rad. et Rhizoma Inulae helenii) в виде отваров, корень и корневище синюхи лазурной (Rad. et Rhizoma Polemo-nii coerulei) и мыльный корень (Rad. Saponariae) в виде отваров или настоев. Все эти препараты применяют при острых и хронических воспалительных заболеваниях органов дыхания по столовой ложке 3—5 раз в день. Отхаркивающий эффект объясняется местнораздражающим действием С. на слизистые оболочки жел.-киш. тракта, вследствие чего рефлекторно стимулируется деятельность бронхиальных желез, усиливаются активность кубического реснитчатого эпителия и перистальтика гладкой мускулатуры бронхов, уменьшается вязкость мокроты и облегчается ее эвакуация из дыхательных путей.
Противосклеротический эффект стероидных Сапонинов (препараты диоспонин и полиспонин) связан с их влиянием на липидный обмен, в частности на процессы всасывания холестерина и на сосудистую проницаемость. Эти препараты применяют при атеросклерозе с локализацией процесса в различных отделах сердечно-сосудистой системы.
Стимулирующее и адаптогенное действие настоек женьшеня (Panax ginseng С. А. Mey), аралии маньчжурской (Aralia manshurica Rupp, et Maxim) и экстракта элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus) зависит от содержания в этих растениях тритерпеновых С. Об этом свидетельствует также наличие выраженной стимулирующей активности у тритерпеновых С., выделенных из аралии маньчжурской (препарат сапарал). Перечисленные настойки и сапарал применяют в качестве тонизирующих и общеукрепляющих средств при неврастении, психастении, умственном и физическом переутомлении, гипотонии.
Тритерпеновые С., экстрагированные из каштана конского (Aesculus hippocastanum L.), эффективны при варикозном расширении вен, тромбофлебитах, геморрое и других заболеваниях, связанных с нарушением периферического кровообращения (препараты эскузан и эсфлазид). Они укрепляют капилляры, обладают антитромботической активностью, оказывают противовоспалительное и противоотечное действие.
Практически все С. являются гемолитическими ядами (см.). При введении внутрь в небольших дозах С. действуют раздражающе на слизистые оболочки. В более высоких концентрациях С. могут вызвать рвоту, понос, кровоизлияния в слизистые оболочки жел.-киш. тракта. При попадании С. в кровь возникают нарушения сердечной деятельности, одышка, общая слабость, явления угнетения ц. н. с. (от сонливости до бессознательного состояния), возможны судороги и параличи.
Первая помощь и неотложная терапия при отравлении С. заключаются в немедленном введении специфического антидота, обильном промывании жел.-киш. тракта, при шоке и коллапсе внутривенно вводят 40% р-р глюкозы (до 150 мл) повторно с небольшими дозами инсулина (12—16 ЕД), сердечные средства, дезинтоксицирующие плазмозаменяющие р-ры и др. При нарастании симптомов отравления показан гемодиализ (см.) или перитонеальный диализ (см.).
При вскрытии погибших от отравления Сапонинами отмечают воспалительные изменения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, множественные кровоизлияния во внутренних органах, гемолиз различной степени. При поступлении в кровь значительных количеств С. возможна мгновенная смерть от паралича дыхательного центра, при этом морфологические изменения внутренних органов отсутствуют.
Качественной пробой на С. является определение способности содержащих их р-ров или экстрактов из тканей в присутствии 0,85% р-ра натрия хлорида вызывать гемолиз in vitro. Количественное определение С. в биол. материале производят методом тонкослойной хроматографии (см.).
Библиография: Вильнер А. М. Кормовые отравления сельскохозяйственных животных, с. 157, 404, Л., 1966; Каррер П. Курс органической химии, пер. с нем., с. 885, Л., 1960.
С. Я. Соколов; В. В. Томилин (суд.).
Источник