Микроскопический метод
К микроскопическому методу прибегают в том случае, если макроскопический метод не дал должных результатов. Метод заключается в исследовании под микроскопом спороношений возбудителей или пораженных тканей растений.
Микроскопический анализ ценен тем, что позволяет обнаруживать характерные и безусловно точные признаки, присущие возбудителям (грибы, бактерии, вирусы), например, у грибов форму и цвет спор, форму сумок, наличие парафиз и др. Для практиков этот метод хорош в большей мере тем, что с его помощью можно установить наличие возбудителя в тканях растения, когда нет явных признаков поражения. При исследовании пораженных растительных тканей с целью обнаружения бесцветной или слабоокрашенной грибницы используют дифференцированное окрашивание. Так, для диагностирования инфекционного полегания производят окрашивание КМпО4. С этой целью берут кусочек стебелька в области корневой шейки, размачивают его в капле воды и раскатывают до образования тонкой полоски ткани, затем наносят на эту полоску каплю 3-5 % раствора марганцевокислого калия. Через 2-3 минуты препарат промывают водой и рассматривают под микроскопом. В случае инфекционного характера болезни клетки тканей будут заполнены гифами гриба бурого цвета. При неинфекционном полегании в клетках просматривается сжавшаяся плазма.
При диагностировании шютте обыкновенного сосны на ранних стадиях развития продольные срезы хвои погружают на несколько минут в этиловый спирт, затем споласкивают водой и помещают в состав 1% раствора анилинового синего и молочной кислоты (1:1). После этого срезы подогревают до парообразования, краситель удаляют с помощью фильтровальной бумаги, а срез нагревают в молочной кислоте. При этом гифы гриба становятся синими или темно-голубыми и хорошо выделяются на светлом фоне тканей хвои.
Дифференцированную окраску грибов применяют также и при микроскопическом исследовании тканей древесины, пораженной дереворазрушающими грибами. Так, В. Рипачек рекомендует с целью окрашивания грибных гиф погружать срезы древесины в дистиллированную воду, к которой добавляют несколько капель 10% раствора азотнокислого серебра. После такой обработки гифы окрашиваются в темно-бурый цвет, а древесина приобретает лишь светло-коричневый оттенок.
По способу С.И. Ванина тонкие срезы пораженной древесины на предметном стекле обрабатывают 10 % раствором азотнокислого серебра, подогревают до кипения, затем смывают несколькими каплями воды и обрабатывают 10% раствором едкого калия (КОН). Снова доводят до кипения, отмывают в воде и рассматривают под микроскопом. Препарат окрашивается в бурый цвет, гифы становятся более темными, древесина – светлее.
При диагностике болезней бактериальной этиологии широко используют окраску по Грамму и другие методы окрашивания препаратов.
Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:
Источник
Микроскопический анализ лекарственного растительного сырья
Для рассмотрения лекарственного сырья под микроскопом из сырья должен быть приготовлен препарат. Рассматриваемый объект помещают на предметное стекло в капле жидкости и покрывают покровным стеклом. Воздух, находящийся в растительных тканях сухого объекта лекарственного сырья, выглядит в микроскопе темным пятном и мешает рассмотрению строения препарата; поэтому он должен быть вытеснен из тканей, что достигается осторожным нагреванием препарата.
Техника приготовления микропрепарата разнообразна. Она зависит от состояния, в котором находится сырье: цельное, резаное или порошкованное, и от принадлежности его к определенной морфологической группе — лист, кора, подземный орган.
Целью микроскопического анализа сырья является обычно установление его подлинности; поэтому, рассматривая его под микроскопом, необходимо сосредоточить все свое внимание на тех признаках, которые отличают определенный орган одного растения от того же органа другого растения. Такие признаки называются диагностическими, и микроскопический анализ сводится к их нахождению.
Для приготовления препарата из порошкованного объекта поступают так: на предметное стекло наносят 1 — 2 капли соответствующей включающей жидкости, смачивают в ней кончик препаровальной иглы и берут ею столько порошка, сколько пристает на кончик; затем равномерно размешивают его в капле приготовленной на предметном стекле жидкости и покрывают препарат покровным стеклом, стараясь, чтобы под него не попал воздух; если жидкости под покровным стеклом окажется мало, ее добавляют, нанося пипеткой каплю жидкости рядом с покровным стеклом, под которое ее быстро затянет; если, наоборот, жидкости окажется много и она будет выходить из-под покровного стекла, ее убирают полоской фильтровальной бумаги. Жидкость выбирают в зависимости от объекта, подлежащего рассмотрению.
Если надо рассмотреть кристаллы или строение отдельных тканей, берут или просветляющую жидкость, лучше всего, раствор хлоралгидрата, или воду. Для установления строения крахмальных зерен лучше брать воду, так как в растворе хлоралгидрата они растворяются. Далее, выбирают жидкость, дающую микрохимическую реакцию на вещества, находящиеся в рассматриваемом объекте. Например, реакцию на одревесневшие ткани делают с флороглюцином и соляной кислотой; нa дубильные вещества — с раствором железоаммонийных квасцов. Иногда приходится приготовлять несколько препаратов, чтобы рассмотреть все диагностические признаки.
Диагностическими признаками для листа будут строение эпидермиса и выросты на нем: волоски, железки и включения в основной паренхиме — кристаллы щавелевокислого кальция.
В аптеке плоды и семена находятся или в порошкованном, или в целом виде. Диагностическими признаками для них будут: 1) строение семенной оболочки или околоплодника,. 2) химическая природа запасных питательных веществ.
В случае цельных плодов и семян микроскопического исследования обычно не требуется: их подлинность можно установить по внешнему виду. Лишь изредка, в сомнительных случаях, прибегают к микроскопии
Срезы с плодов или семян делают после предварительного: увлажнения, которое достигается или выдерживанием в течение суток во влажной камере, или при более грубых объектах замачиванием в течение нескольких дней в водном глицерине. Мелкие, но плоские семена трудно удержать в руке при изготовлении срезов, и их удерживают при помощи пробки. Пробку кипятят и распаривают, затем надрезают скальпелем и, поместив в разрез семена, делают срез бритвой. Круглые семена в пробке не удержать; поэтому их помещают в парафин. Берут кусочек парафина и втыкают в него нагретый на пламени горелки кончик иглы; парафин расплавляется, в него вносят семя, а когда парафин застынет делают срезы бритвой через объект вместе с парафином. Затем срезы помещают и предметное стекло и рассматривают в растворе хлоралгидрата. Для ознакомления с техникой работы можно взять семена горчицы или льна.
Коры могут быть порошкованные, резаные и цельные . Важной в диагностическом отношении в корах будет механическая ткань. Она представлена одревесневшими волокнами и каменистыми клетками. Волокна могут быть узкие и длинные или более толстые и короткие. Иногда они лежат пучками, причем могут сопровождаться кристаллической обкладкой; иногда разбросаны в основной ткани коры поодиночке или небольшими группами по 2 — 3 волокна. Каменистые клетки: тоже могут быть расположены одиночно или группами, „гнездами».
Корни и корневища тоже могут быть порошкованные резаные или цельные. Важным в диагностическом отношении в данном случае является строение проводящих пучков и характер питательного запаса. Большинство подземных органов содержит крахмал; в этом случае характерным будет строение крахмальных зерен; корни сложноцветных часто, содержат вместо крахмала инулин, а некоторые корни, например сенега, жирное масло. В сосудистопроводящих пучках; наиболее интересно строение сосудов: ситовидные трубки в сухих объектах плохо различимы и диагностического значения не имеют. Механические элементы, как и в корах, бывают в виде волокон и каменистых клеток.
Источник